USO DE MARCADORES PCR-RFLP DEL ADNR RIBOSOMAL PARA LA IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE ESPECIES DE FUSARIUM SPP., EN CULTIVOS DE BABACO Y NARANJILLA EN ECUADOR

摘要

Entre los factores bióticos, que determinan mayores pérdidas económicas en los cultivos agrícolas, se encuentran los hongos fitopatógenos. Fusarium oxysporum, constituye un complejo de especies con una considerable variación morfológica y fisiológica; lo que dificulta su identificación, esto ha conducido al desarrollo de herramientas moleculares para el estudio de formas especiales de este patógeno. En particular, F. oxysporum f. sp. vasconcellea (Fov) y F. oxysporum f. sp. Quitoense (Foq) infectan cultivos de babaco y naranjilla provocando la marchitez vascular del babaco (MVB)  y la marchitez vascular de la naranjilla (MVN). En esta investigación se aplicó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa y los fragmentos de restricción de longitud polimórfica (PCR-RFLP) del espaciador intergénico (IGS) del ADN ribosomal (ADNr) para determinar la diversidad genética de formas especiales (f. sp.) de F. oxysporum, agente causal de la MVB y MVN. Las secuencias IGS fue amplificado por PCR y secuenciadas en ambas direcciones. Las secuencias IGS fueron utilizadas para la construcción de árboles filogenéticos e identificación de sitios de restricción específicos para las enzimas EcoRI y ApaI e identificación de polimorfismos de un solo nucleótido (SNP). El tamaño de los productos de PCR de la región IGS fue de 1935 y 2603 nucleótidos, los mismos que fueron determinados en base al alineamiento de secuencias y al marcador de peso molecular. El análisis filogenético y la técnica PCR-RFLPs ubica a las secuencias de babaco y naranjilla en grupos diferentes. En el primer grupo se ubican las secuencias NA4 y NA6; en el segundo grupo BA3, BA4, BA5, BA6 y NA2; en el tercer grupo BA1, BA2, NA1, NA3 y NA5. Estos resultados demuestran que cada grupo evolucionó a partir del mismo ancestro común, por lo tanto, cada grupo tendría un origen polifilético.

Palabras claves: endonucleasas, restricción, polimorfismos, haplotipos, biotrofos quitoense, vasconcellea.